提 RNA、逆转录cDNA，最后qPCR。

你以为这样就可以美滋滋地坐等结果了？

结果图出来时，对于刚接触qPCR 的你来说内心是否是崩溃！！！

这是啥？怎么看？

1. 首先在Analysis Settings处设置好内参和对照组，如果上机前设置好，可以直接跳至第 3 点。

2. 点击进去后，选择对应好的内参和对照组。

3．选择好内参和对照组后，我们首先看看 PCR 跑的有没有问题。

三角形代表这个孔出现了问题，而三角形中的数字是几则代表了孔中有几个问题。具体又是什么问题呢？我们就要通过 analysis 中的 QC Summery 进行查找。

比如图中的 A9 孔，有 2 个问题。

第 1 个问题如上图所示，表示可能是你上样时导致的样品复孔之间差异较大。

第二个问题则是下图中，系统认定 A9 孔中的数值偏差较大，属于异常值。

当然，还有比较常见的问题是引物二聚体引起的双重峰，如 A4 孔。

4. 溶解曲线（melt curve）：表示随温度升高 DNA 的双螺旋结构降解程度的曲线。正如上面提到的，正常的样品孔溶解曲线应该是单峰的，如下图。如果出现了双峰，则要考虑是否引物设计不合理或者引物过量引起溶解曲线出现多峰的情况。

5. 最后我们看看最重要的结果，也就是目的基因的变化情况了。在内参与对照组选择没错的情况下，点击 gene expression 选项，选中你想查看的样品孔的基因表达情况。