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Transwell小室
所谓trans即转运，转移，穿过的意思，而well则为小室，小皿的意思。字面上理解为一类具有通透性的杯状物体，是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架。
Transwell检测技术就是将Transwell小室放入培养板中，小室内为上室，培养板内称下室，上室内装着上层培养液，一般为无血清培养基，下室内装着下层培养液，一般为高浓度血清的培养基，如20%1640。上下层之间隔着聚碳酸脂膜。这是一种很特殊的膜，这种膜具有一定的通透性，不同的型号有着不同的通透度。我们将细胞种在上室内，由于此膜具有一定的通透性，而上室内万分饥渴的细胞会努力穿过这层膜，通过小孔进入到营养极其丰富的下室中。这样就可以研究，下层培养液的成分对细胞生长，运动等的影响。这一实验经过几十年的发展已经渐渐的成为广大研究肿瘤或者其他细胞侵袭转移的重要实验。
应用实验
应用不同的孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
一、共培养体系：小于3.0μm孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0μm以下孔径。常用0.4、3.0μm。将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。
二、趋化性实验：可用5.0、8.0、12.0μm膜，上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室，计数进入下室的细胞量可反映下室成分对上室细胞的趋化能力。
①细胞B对细胞A的趋化作用：将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的趋化作用。
②趋化因子对细胞的趋化作用：将细胞种于上室，下室加入某种趋化因子，可研究该趋化因子对细胞的趋化作用。
三、细胞迁移实验：常用8.0、12.0μm膜，上室种细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映细胞的迁移能力。 Transwell细胞迁移实验是常用的细胞功能检测手段之一，其应用范围包括：内皮细胞血管形成；肿瘤细胞生物学；炎症研究；ADME/Tox药物开发；细胞分化；细胞成像研究。
四、细胞侵袭实验：常用8.0、12.0μm膜，原理与细胞迁移实验类似。Transwell侵袭实验，其实原理简单地说就是用一层膜将高营养的培养液和低营养的培养液隔开，细胞放在低营养的培养液里，为了找吃的，细胞会往高营养的培养液里面跑，但是有膜挡着，所以要穿过膜才行。我们在膜上涂上一层基质胶，模仿细胞外基质，于是细胞要把基质消化了才可以从低营养的培养液跑到高营养的培养液里面，最后我们检测高营养的培养液里细胞量就可以知道细胞的侵袭。
实验步骤
1.制作人工基底膜混合液
首先使用 marker 笔在 6 孔板背后，用直尺比着，均匀的划横线，大约每隔 0.5~1cm 取出-20℃冻存的Matrigel凝胶，预置4℃融化后，按1:5将100μL Matrigel与无血清DMEM培养基混合，整个操作过程在冰上及无菌条件下进行。
2.包被基底膜
Transwell上室多孔聚碳酸酯膜滤膜上加入人工基底胶混合液50μL，37℃平铺胶化2-3h。
3.准备细胞悬液和小室
消化法从细胞培养瓶中获取细胞：消化、离心和计数后用无血清DMEM培养基制成单细胞悬液；
上室加入200μL单细胞悬液（细胞数约为1.5×105/室）；
下室加入800μL含20%FBS的DMEM;
装有Transwell小室的24孔板放置37℃、5%CO2的培养箱中培养。
4.染色和计数
培养结束，取出Transwell小室，PBS洗涤3遍（每遍5min）；
4%多聚甲醛室温固定15min,PBS洗涤3遍；
用棉签轻轻擦去上层未穿透的VSMC；
0.5%结晶紫染色15-30min，PBS洗涤3遍
风干，接下滤膜后反贴在载玻片上，用显微镜低倍镜观察，每个滤膜随机选取3个视野，高倍镜（×200）下分别计数3个视野的穿膜细胞数，计算每个视野的平均细胞数。
注意事项
1.根据待测细胞体积大小选择合适孔径的chamber。常用的为8.0-μm孔径，如果细胞体积较大可以考虑用10-μm孔径；
2.细胞悬液加入膜中央，尽量保证液面水平；
3.不能产生气泡：下层培养液和小室间易产生气泡，可导致下层培养液的趋化作用减弱甚至消失，一旦产生气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板中；
4.细胞密度为1-10×105，不要超过5×105；
5.处理组和对照组细胞密度要一致；
6.固定染色擦洗时动作小心，避免擦去膜底面的细胞。但一定要充分擦净膜表面上未迁移的细胞，以免影响读数。尤其是膜周边上可用细牙签或小镊子缠上湿棉花擦洗，但要小心避免将膜戳破；
7.充分晾干，避免残留水分导致镜下聚焦不一致。
东澳服务
1.服务项目
共培养体系;趋化性实验;迁移实验;侵袭实验
2.实验流程
细胞培养→接种细胞→细胞染色→细胞计数→观察拍照
3.示例
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