在科研实验中，为了获得纯的重组质粒DNA，需要允许外源DNA分子进入的细胞。经过一些特殊方法（电击法、CaCl2法）等处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的细胞，即感受态细胞。

回顾2017,

东澳生物最畅销的产品当属

感受态和MCAO线栓

制作感受态很简单却非常麻烦

东澳生物实验室

出厂的每一支感受态都备受好评，

实验室的达人小伙伴儿们

告诉你，

怎样高效制备感受态~

基本制备步骤

1.从37℃培养16-20 h的平板中挑取一个单菌落(直径2-3 mm)，转到一个含有100 ml LB或SOB培养基的1L烧瓶中。于37℃剧烈振摇培养3 h。一般经验，1 OD600约含有大肠杆菌DH5α 109 个/mL。

2.将细菌转移到一个无菌、一次性使用的、用冰预冷的50 ml聚丙烯管中，在冰上放置10 min，使培养物冷却至0℃。

3.于4℃用Sorvall GS3特头（或与之相当的转头）以4 100 r/min离心10 min，以回收细胞。

4.倒出培养液，将管倒置1 min以使最后的痕量培养液流尽。

5.每50 ml初始培养液用30 ml预冷的0.1 mol/LCaCl2-MgCl2溶液(80 mmol/L MgCl2，20 mmol/L CaCl2)重悬每份细胞沉淀。 

6.于4℃用Sorvall GS3转头（或与之相当的转头）以41 00 r/min离心10 min，以回收细胞。

7.倒出培养液，将管倒置1  min以使最后的痕量培养液流尽。

8.每50 ml初始培养物用2 ml用冰预冷的0.1 mol/L CaCl2(或TFB)重悬每份细胞沉淀。

9.此时，可以用新鲜制备的感受态细胞直接做转化实验，也可以将细胞冻存于- 70℃。

洁净是最重要的~

无菌都无所谓，在操作台上可正常操作。离心力要注意不要超过2500g,建议1500-2000g 5min。

涂板要注意，不要觉得不匀而多次反复。

轻轻在平板上带一下感觉板上大部分地方走过即可，特别在冰箱中保存过或在温箱中温浴2小时以上的板。涂完后建议空气晾干（20-30分钟）这样会减少卫星菌落出现。 

预冷是必要的。

整个过程的低温也并非特别重要，只要注意就行了，我在去残液时经常在室温倒置1min，对感受态效率提高有帮助，第一次多加一点缓冲液，我经常加至20ml，效果不错。

关于感受态的制备方法~

关于大肠杆菌的感受态制备及转化的方法很多，最复杂的莫过于电转化，而最简单的则是将LB平板上的菌落直接挑入装有缓冲液的EP管冰箱即开始转化。对于做克隆工作的人而言，高而稳定的感受态可减轻不少麻烦。 

省心、省时，又省力

东澳生物

墙\ 裂\ 推\ 荐

毕竟，

开学季大回馈就要来了！！

[东澳]大肠杆菌感受态列表

BL21(DE3)chemically Competent Cell 

产品特点：BL21菌株用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。

DH5α Chemically Competent Cell 

产品特点：大肠杆菌DH5α是一种常用于质粒克隆的菌株，在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。

STBL3 Chemically Competent Cell

产品特点：STBL3感受态细胞是慢病毒载体系统推荐使用的菌株，可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率。

Top 10 Chemically Competent Cell

产品特点：TOP10感受态细胞是一种常用于质粒克隆的菌株，适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。

使用方法：

1 从-70℃ 超低温冰箱中取出一管感受态菌，冰浴10 min使其解冻；

2 加入适量目的质粒DNA，冰浴30 min；

3 插入42℃水浴中90S进行热休克，然后冰浴5 min；

4 加入0.7ml无抗LB培养基（培养基预热至37℃），然后37℃ 160-180rpm/min震荡培养45-60min；

5 取上述转化混合液100-300μl，在含合适抗菌素的固体LB平板培养皿上用玻璃涂布棒涂布均匀；

6 *如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话，滴完菌液后再在平板上滴加40μl 2% X-gal，8μl 20% IPTG，涂布均匀；

7 放入37℃恒温培养箱倒置培养过夜；

8 观察平板上长出的菌落克隆